前言

抗體偶聯藥物（ADCs）是一種通過一個合理構建的連接子將細胞毒性小分子藥物偶聯到單克隆抗體上的復合物，可以向腫瘤內選擇性地輸送有效的細胞毒性藥物。經過幾十年的深入研究和開發，該領域取得了重大進展，自2000年美國食品和藥物管理局（FDA）批準第一個ADC藥物Mylotarg治療CD33+急性髓系白血?。ˋML）以來，全球共有14個ADC獲得批準。

(相關資料圖)

值得注意的是，在2020年第四季度，有三項重磅交易涉及針對同一抗原ROR1的ADC。首先，CStone Pharmaceuticals和LegoChem Biosciences簽訂了ROR1 ADC“LCB71（CS5001）”的全球許可協議。然后默克收購了VelosBio及其ROR1 ADC“VLS-101”，勃林格殷格翰分別以27.5億美元和14.5億美元（合并預付款和里程碑付款）收購了NBE Therapeutics及其ROR1 iADC“NBE-002”，這些收購突顯了ROR1在腫瘤學中的重要性及其作為ADC靶點的良好前景。

ROR1的結構和表達

ROR1是一種跨膜受體，包含細胞外部分、跨膜區和細胞內區域。細胞外部分包括免疫球蛋白樣結構域（IG）、富含半胱氨酸結構域（CRD）和Kringle結構域（KD）。CRD通過與配體Wnt5a結合來調節非經典WNT信號，KD介導ROR1與其他受體的相互作用，如ROR2。

細胞內部分包括一個酪氨酸激酶結構域、兩個富含絲氨酸/蘇氨酸的結構域和一個富含脯氨酸的結構域。富含脯氨酸的結構域通過招募包含SH3結構域的蛋白質，包括HS1、DOCK2和cortactin，負責激活細胞遷移和增殖信號。富含絲氨酸/蘇氨酸的結構域與銜接蛋白（如14-3-3 zeta）發生物理相互作用，導致對凋亡的抵抗。

ROR1主要在胚胎發生過程中表達，ROR1基因敲除對胚胎是致命的，表明ROR1在胚胎發生中起著關鍵作用。ROR1在大多數成人組織中不表達，除了一些高表達ROR1的脂肪組織、內分泌腺、胃腸道和未成熟B淋巴細胞，ROR1在這些成人組織中的功能目前尚不清楚。

ROR1在惡性腫瘤中的作用

許多研究表明，ROR1在惡性腫瘤細胞中高表達，其最初被鑒定為血液系統惡性腫瘤中的腫瘤胚胎基因。除了血液系統惡性腫瘤外，ROR1的異常表達也作為生物標記物和治療靶點在多種實體瘤中被發現。

ROR1在乳腺癌中高表達，其與上皮間質轉化（EMT）、腫瘤轉移和侵襲性疾病有關。ROR1在肺癌細胞中的表達水平也很高，可作為肺腺癌患者的預后生物標志物。ROR1的沉默導致代表人肺腺癌的細胞系中的生長抑制。此外，還有關于ROR1在其他類型癌癥中表達的報道，包括卵巢癌、結直腸癌、子宮內膜癌、胃癌、黑色素瘤和胰腺癌。

ROR1不僅在惡性細胞中異常表達，還參與對細胞增殖、存活和遷移重要的信號蛋白的激活。在CLL中，Wnt5a/ROR1通過ARHGEF家族銜接蛋白激活Rho GTPase RhoA和Rac1，Wnt5a還誘導HS1的酪氨酸磷酸化，導致ROR1依賴的細胞遷移。此外，Wnt5a/ROR1誘導NF-κB信號通路的激活，導致促炎癥細胞因子如IL-6的自分泌調節。ROR1的表達水平與CLL的進展密切相關，使其成為預后的良好生物標志物。在肺癌中，ROR1參與c-Src和MET的激活，導致腫瘤細胞凋亡的抑制，ROR1還被發現是cavin-1和caveolin-1的支架蛋白，可激活肺腺癌中的AKT。在乳腺癌中，ROR1促進了PI3K/AKT通路的激活，高ROR1表達與疾病更嚴重的進展相關?？傊谠S多類型的惡性腫瘤中觀察到ROR1的異常表達和相關的促生長信號事件，使ROR1成為抗癌藥物開發的一個有吸引力的治療靶點。

ROR1靶向ADC的研究進展

鑒于ROR1在多種癌癥中高表達，而在普通組織不表達或低表達的特性，藥物研發人員開發了多種靶向ROR1的抗腫瘤治療策略，其中ADC藥物的進展較快，并且表現出良好的應用前景。

NBE-002

目前，大多數經批準的ADC都是通過賴氨酸或半胱氨酸殘基將有效載荷與單克隆抗體化學偶聯而產生的藥物異質混合物。相比之下，針對下一代ADC，NBE-002的ROR1是通過人源化抗體（huXBR1-402）與蒽環類藥物PNU-159682在預先設定的藥物抗體比（DAR）下通過sortase a介導的位點特異性轉肽反應進行酶結合而產生的，產生更純凈、更同質的藥物，具有更穩定的生物物理和藥代動力學特征。

SMAC技術利用Sortase A，一種源自金黃色葡萄球菌的轉肽酶，可以催化含有寡甘氨酸的分子連接到具有序列基序的蛋白質（LPXTG）。PNU-159682是奈莫霉素的肝臟代謝物，可抑制DNA拓撲異構酶II，其效力比親本分子高三個數量級。有趣的是，與其他有效載荷相比，基于蒽環類的連接子有效載荷通過SMAC技術的共軛效率更高，DAR在3.7到3.9之間，通過簡單的鏈霉素親和層析步驟可以有效地將DAR增加到4。

除了觀察到NBE-002的直接抗腫瘤活性外，NBE-002能夠增加T細胞對腫瘤的浸潤，并將“冷”腫瘤轉化為“熱”腫瘤，使它們對針對PD-1和CTLA-4的檢查點抑制劑產生反應。因此，NBE Therapeutics的ADC被稱為免疫刺激ADC或IADC。為了測試NBE-002的效力，已經在不同的臨床前癌癥模型中評估了這種iADC，發現NBE-002在每個適應癥中都顯示出顯著的抗腫瘤活性。NBE-002目前正在進行1/2期臨床試驗（NCT04441099），以評估晚期實體瘤，尤其是三陰性乳腺癌患者的安全性和耐受性。

VSL-101

與Adcetris、Polivy和Padcev類似， VLS-101利用蛋白水解可切割的連接子mc vc PAB，將靶向ROR1的單克隆抗體UC-961與微管蛋白聚合抑制劑單甲基auristatin E（MMAE）進行偶聯。UC-961是一種人源化抗體，以高親和力（Kd=2nM）結合到ROR1的域內表位，并通過阻斷Wnt5a與ROR1的結合，對各種ROR1陽性腫瘤細胞具有直接細胞毒活性。

由于UC-961識別獨特的表位，這種抗體在結合時會觸發ROR1的明顯內化，有利于向ROR1陽性腫瘤細胞傳遞細胞毒性有效載荷。VLS-101在體外模型中被證明能有效誘導細胞周期阻滯和凋亡，并在異種移植物模型中有效阻斷體內腫瘤生長。在血液系統惡性腫瘤的一期研究（NCT03833180）中，VLS-101耐受良好，對晚期套細胞淋巴瘤（MCL）或彌漫性大B細胞淋巴瘤（DLBCL）患者有效，MCL組的ORR達47%（7/15），包括3例CR和4例PR；DLBCL組的ORR達80%（4/5），包括2例CR和2例PR。目前，一項針對實體瘤（包括乳腺癌和肺癌）患者的2期研究（NCT04504916）正在進行中。

LCB71（CS5001）

LCB71是另一種抗ROR1 ADC，由LegoChem Biosciences和ABL Bio兩家韓國生物制藥公司共同開發，基石藥業獲得了在韓國境外開發和商業化LCB71的專有權。LCB71使用了另一種酶介導的位點特異性偶聯技術，這種偶聯方法利用法尼基轉移酶，該酶天然催化CaaX基序中存在的半胱氨酸殘基的異戊二烯基化。

該技術利用法尼基轉移酶的底物混雜性，引入香葉基酮焦磷酸（GKPP）基團，用于隨后的烷氧基胺衍生物的化學選擇性偶聯。通過偶聯β-葡萄糖醛酸鍵的吡咯苯二氮卓二聚體（dPBD），利用β-葡萄糖醛酸酶在腫瘤細胞和腫瘤微環境中的高表達，允許選擇性切割和釋放細胞中的游離PBD，最終導致DNA損傷和細胞死亡。

LCB71在Jeko-1（人套細胞淋巴瘤）和MDA-MB-231（人乳腺癌細胞）異種移植瘤模型中均表現出顯著的抗腫瘤活性，且呈劑量依賴性。LCB71是一款有望在ROR1高表達的血液腫瘤和惡性實體瘤中都具有精準治療潛力的候選ADC藥物。

小結

ROR1在各種實體和血液腫瘤細胞中廣泛表達，使其作為AD 藥物開發的極具吸引力的重要靶點。由于獨特的位點特異性偶聯策略，NBE-002和LCB71都是具有給定DAR的同質ADC，這有利于生產制造。此外，兩種ADC中的穩定連接子也提供了更好的藥代動力學特征。盡管VLS-101的產品不是同質性的，可能存在類似于Adcetris、Polivy和Padcev的穩定性問題，但一項1期研究已經證明了MCL和DLBCL患者的安全性和臨床療效，是目前處于2期臨床試驗中的最領先的抗ROR1 ADC。無論如何，所有3個抗ROR1 ADC看起來都非常有前景，而最近的3個主要商業交易可能會促進針對ROR1的多種治療方式的快速發展。

參考文獻：

1.Tyrosine Kinase ROR1 as a Target forAnti-Cancer Therapies. Front Oncol.2021; 11: 680834.

2. Perspectives on the development ofantibody-drug conjugates targeting ROR1 for hematological and solid cancers. AntibTher. 2021 Oct; 4(4): 222–227.

原文標題:ROR1靶向ADC的研究進展

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